Tecnicas Macroscopicas Coproparasitoscopicas: Tamizado

Fundamento:

Se fundamenta en el fenómeno de la filtración, utilizando tamices de diferentes diámetros en donde quedan atrapados los parásitos( trematodos, cestodos, nematodos). Esta técnica permite observar directamente las características morfológicas de los parásitos adultos enteros o fraccionados de los metazoarios.

Material y equipo:

·         1 coladera de tamiz fino

·         1 abatelenguas

·         1 caja Petri

·         1 pinzas

Procedimiento:

1.       Colocar pequeñas porciones de materia fecal en la coladera con ayuda del abatelenguas.

2.       Dispersar la muestra con el abatelenguas y agregarle agua hasta lograr un tamizado lo más limpio posible

3.       Revisar cuidadosamente las partículas de las heces que hayan quedado en la coladera.

4.       Los parásitos encontrados colocarlos en una caja Petri con solución salina.

5.       Se identifica la parte del parasito o el parasito completo

6.       Se reporta el género y la especie del parasito o parte del parasito. 

Conclusión:

El procedimiento de Tamizado, es utilizado para encontrar nematodos en las heces del paciente, es super eficaz y facil de realizar la tecnica, para encontrar los nematodos.

Tecnica de Willis

OBJETIVO

 Aprender a realizar diferente métodos para la identificación y estudio de los parásitos en este caso la búsqueda de huevos y quistes.

FUNDAMENTO

 Willis en 1921, describe este método basado en la propiedad que tienen las soluciones de densidad mayor de hacer flotar objetos menos densos.Este método esta recomendado específicamente para la investigación de protozoarios y helmintos, consiste en la preparar la materia fecal con solución saturada de cloruro de sodio.

Método de concentración por flotación simple.

·         Se usa para la búsqueda e identificación de formas parasitarias como quistes, huevos y helmintos.

·         Se evalúa una gran porción de la muestra.

·         Sensibilidad alta.

·         Fácil rápida y económica.

Es un método de concentración por flotación simple:
en este caso se usa salmuera.
Consiste en preparar el material fecal con Solución saturada de ClNa.
Utilidad
Recomendado especialmente para la investigación de geohelmintos.
Por su sencillez se puede utilizar en el campo, donde no se cuentan con demasiados materiales o reactivos para realizar otros métodos.
Los Huevos de helmintos de peso específico menor que la solución saturada de NaCl tienden a subir y adherirse a una lámina colocada en contacto con la superficie del líquido.
Este método es de alta sensibilidad en el diagnóstico de huevos livianos de helmintos: A. duodenale, N. americanus, A. lumbricoides, H. nana.
Limitaciones
los huevos y quistes de peso especifico menor que la solución saturada de cloruro de sodio tienden a adherirse a un cubreobjetos colocado

MATERIAL

·         Vaso de precipitado

·         Embudo

·         Tubo de ensaye

·         Portaobjetos

·         Cubreobjetos

·         abate lenguas

REACTIVOS

·         Sol. Saturada de NaCl.

·         Sol. De yodo lugol.

PROCEDIMIENTO

1.- Tomar aproximadamente 1 gr. de heces fecales con un abate lenguas.

2.- Colocar la muestra en un vaso de precipitado y mezclar con 10 ml. de solución saturada de cloruro de sodio.

3.-En un tubo de ensaye filtre la mezclar con una gasa, llenando completamente el tubo.

4.-Coloque un portaobjetos sobre el tubo de manera que el líquido haga contacto con el portaobjetos.

5.-Esperamos de 5 a 10 minutos.

6.-Los quistes o huevos flotaran y quedaran adheridos a la cara del portaobjetos que esta en contacto con la mezcla.

7.-Colocar una gota de yodo lugol en el porta objetos y colocar el cubreobjetos.

8.-Examinar la muestra al microscopio con el objetivo 40x, buscamos quistes o huevecillos de parásitos.

9.-Reportar los resultados .

  

OBSERVACIONES

En esta practica realizamos dos muestras diferentes, en la primera no encontramos nada interesante solo logramos ver restos de alimentos y en la segunda un campo de quistes en especial de Entamoeba histolitica.

CONCLUSIÓN 

La tecnica de willis es muy facil y comoda para encontrar los huevesillo de helmintos. es muy economica y sencilla de realizar.

Método de concentración por sedimentacion de "RITCHIE"

Fundamento

Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda de formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios.
Unas ventajas que tiene ése método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para la evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.

Material y equipo

-Centrifuga
-Tubos de ensaye cónicos de 15 ml
-Gasa cortada en cuadros
-Embudos de polietileno
-Vasos de precipitado de 5 ml
-Aplicadores de madera
-Pipetas Pasteur con bulbo
-Portaobjetos de 26 x 76 mm
-Cubreobjetos de 22 x 22 mm
-Microscopio

-Solución salina isotónica
-Solución de formaldehido al 10%
-Éter

Método

a) Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1 gr. de la materia fecal en el vaso de precipitados, se añaden 10 ml de solución salina y se homogeniza

b) Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo, recogiendo el filtrado en el tubo cónico

c) Se centrifuga la suspensión durante 2 minutos a 2000 rpm

d) Se decanta el sobrante y se resuspende el sedimento con solución salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo 2 veces mas

e) Al último sedimento se agregan 10 ml de solución de formaldehído al 10% se mezcla y se deja reposar durante 10 minutos

f) Se añaden después 5 ml de éter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan enérgicamente durante 30 segundos.

g) Se centrifuga durante 2 minutos a 2000 rpm

h) Después de centrifugar se observan 4 capas:
* Éter e la superficial
*Un tapón de restos fecales
*Formaldehído
*Sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios

i) Se decanta el sobrante

j) Se introduce la pipeta Pasteur hasta el sedimento, se extrae con cuidado una gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos

k) Se le añade una gota de lugol y con uno de los ángulos del cubreobjetos se homogeniza, cubriéndolo con el mismo

l) Se observa la preparación en el microscopio con objetivos de 10X y 40X

Conclusion

Esta practica es muy similar a las que hemos venido trabajando, en su proceso se cambian algunas cosas como el agregarle Eter y soluciones como formaldehido al 10%.

Fotos

Practica No. 13: Flotación de Faust - bis

FUNDAMENTO:

Este método se utiliza solución de Zn, cuya densidad especifica es de 1.180 (33%), que conforma un medio de densidad más alta que la de los huevos: Necator 1.055, Tricocéfalo 1.150, Ascaris fértil 1.110 y facilita que los huevos livianos de estos helmintos, con menor peso específico que la solución, se concentren y floten.

La concentración adecuada aconsejada es la que usa como reactivo una solución acuosa de sulfato Zn al 33% con una densidad al 1.180. El agua utilizada diluye y lava la materia fecal. El filtrado con gasa doblada y evita que los detritos gruesos traspasen las paredes, la centrifugación enriquece en la delgada película la superficie del líquido centrifugado con los huevos livianos de algunos helmintos.

Tipo de Muestra:

-3 muestras de heces fecales.

Material:

-3 Abate-lenguas de madera.

-3 Aplicadores de madera.

-3 Vasos de precipitados de 250 ml.

-3 Embudos de cristal.

-3 Portaobjetos de 25x76 mm.

-3 Cubreobjetos.

-1 Mechero.

Reactivos:

-Yodo Lugol.

Equipo:

-Microscopio.

TÉCNICA:

1. Mezclar bien una porción de materia fecal para preparar una superficie de 10 partes de agua destilada.

2.Filtrar la suspensión a través de un gasa doblada en cuatro, sobre un tubo de centrifuga, ayudándose con  un embudo pequeño.

3.Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 1 min.

4.Decantar el líquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente. Resuspender el sedimento.

5.Repetir el procedimiento 2 veces hasta que el líquido sobrenadante esté listo.

6.Decantar nuevamente el líquido sobrenadante reemplazándolo por igual cantidad de solución de sulfato de Zn al 33%. Mezclar bien la solución con el sedimento. Centrifugar durante 1 minuto a 1500 rpm.

7.Tomar de 3-4 gotas de las partículas que flotan en la superficie del líquido. Colocarlos en un porta objeto y mezclarla con 1-2 gotas de lugol, colocar cubre objeto.

8.Examinar al microscopio y reporte sus resultados.

CONCLUSIÓN:

La finalidad de la practica es la búsqueda de parásitos. y esta es una de las practicas mas recomendadas para encontrarlos, debido a su alta efectividad; es uno de los mas utilizados en los laboratorios. Esta practican al igual que la anterior, la realizamos para el reforzamiento de la misma, solo que esta vez, la muestra que nos toco fue de un paciente sano; y por esa razón solo localizamos fibras.

FOTOS:

Practica No. 12: Método de concentración- Flotación de Faust

Fundamento:

Este método se utiliza solución de Zn, cuya densidad especifica es de 1.180 (33%), que conforma un medio de densidad más alta que la de los huevos: Necator 1.055, Tricocéfalo 1.150, Ascaris fértil 1.110 y facilita que los huevos livianos de estos helmintos, con menor peso específico que la solución, se concentren y floten.

La concentración adecuada aconsejada es la que usa como reactivo una solución acuosa de sulfato Zn al 33% con una densidad al 1.180. El agua utilizada diluye y lava la materia fecal. El filtrado con gasa doblada y evita que los detritos gruesos traspasen las paredes, la centrifugación enriquece en la delgada película la superficie del líquido centrifugado con los huevos livianos de algunos helmintos.

Tipo de Muestra:

-3 muestras de heces fecales.

Material:

-3 Abate-lenguas de madera.

-3 Aplicadores de madera.

-3 Vasos de precipitados de 250 ml.

-3 Embudos de cristal.

-3 Portaobjetos de 25x76 mm.

-3 Cubreobjetos.

-1 Mechero.

Reactivos:

-Yodo Lugol.

Equipo:

-Microscopio.

Técnica:

1. Mezclar bien una porción de materia fecal para preparar una superficie de 10 partes de agua destilada.

2.Filtrar la suspensión a través de un gasa doblada en cuatro, sobre un tubo de centrifuga, ayudándose con  un embudo pequeño.

3.Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 1 min.

4.Decantar el líquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente. Resuspender el sedimento.

5.Repetir el procedimiento 2 veces hasta que el líquido sobrenadante esté listo.

6.Decantar nuevamente el líquido sobrenadante reemplazándolo por igual cantidad de solución de sulfato de Zn al 33%. Mezclar bien la solución con el sedimento. Centrifugar durante 1 minuto a 1500 rpm.

7.Tomar de 3-4 gotas de las partículas que flotan en la superficie del líquido. Colocarlos en un porta objeto y mezclarla con 1-2 gotas de lugol, colocar cubre objeto.

8.Examinar al microscopio y reporte sus resultados.

Conclusión:

La finalidad de la practica es la búsqueda de parásitos. y esta es una de las practicas mas recomendadas para encontrarlos, debido a su alta efectividad; es uno de los mas utilizados en los laboratorios.

Fotos:

Practica No. 1: Coproparasitoscopico en Fresco

Introducción: 

Como sabemos uno de los primeros microscopistas fue Antón Van Leeuwenhook y a mediados del siglo XVII fue el primero en utilizar este método al observar directamente en sus propias heces fecales, trofozoitos de Giardia lamblia.                                                                                                                    El método que necesitas es menos equipo y el más sencillo de realizar, corresponde a las preparaciones húmedas, que se hacen directamente con muestras de heces. Para las preparaciones directas de heces frescas o no preservadas, el formol sirve de diluyente.

Las preparaciones no teñidas son de especial valor para el estudio de parásitos vivos, como trofozoitos de protozoarios móviles, huevos helmitos y larvas de nematodos . El lugol se emplea principalmente para la búsqueda e identificación de quistes y larvas, con base a sus características. La mezcla normal en el tracto intestinal por lo general no asegura  una distribución uniforme de trofozoitos de protozoarios móviles, huevos de helmitos y larvas nematodos.

Sin embargo el examen de materia fecal directo o en fresco puede revelar o no parásitos, dependiendo de la intensidad de la infección.

Fundamentos:

La solución salina isotónica de las condiciones adecuadas para que las células se mantengan viva. El medio ideal para todo tipo de parásito que puede encontrarse en las muestras de heces, en cualquier etapa de su desarrollo es la solución salina fisiológica, y el lugol en la práctica ha demostrado su eficacia para la tinción e identificación de parásitos intestinales.

Tipo de Muestra:

-2 Muestras de heces fecales.

Material:

-4 Aplicadores de madera.

-4 Portaobjetos de 25x76 mm

-4 Cubreobjetos.

Reactivos:

-Solución salina isotónica

-Lugol parasitológico.

Equipo:

-Microscopio

Técnica:

Técnica. (La técnica se debe repetir por cada muestra tenida).

1.       En un portaobjetos coloca una gota de solución salina isotónica.

2.       Con la punta del aplicador toma una pequeña muestra de aprox. de 1 a 4 mg de heces, en muestras con moco y sangre elegir esta parte para estudiar.

3.       Mezclar procurando hacer una suspensión en preparación delgada y no un frotis.

4.       Quitar de la suspensión fibras y otros fragmentos grandes.

5.       Colocar el cubreobjetos lentamente procurando no dejar burbujas.

6.       Examinar al microscópico en forma sistemática a seco débil y a seco fuerte.

7.       Repetir la operación con una gota de lugol en lugar de la solución salina.

Reporte:

En la muestra la primera muestra se observó fibra normal y fibra vegetal. Lo importante se observó un  quiste del parásito.

Conclusión:

Esta es una practica de los mas común, usada en los Laboratorios Clínicos, es uno de los estudios mas económicos y rápido en realizarse, sin embargo es poco seguro, osea, tiene posibilidad de falsos negativos, por lo cual a veces es necesario repetir. En esta practica nos dimos cuenta de que en las heces fecales se puede detectar a la bacteria que causa la Amibiasis, el parásito de la Entamoeba Hystolitica, que se encuentra en forma de quistes o trofozoitos.