Recuento de Reticulositos

OBJETIVO: Que el alumno aprenda a identificar y cuantificar correctamente a los reticulositos.

INTRODUCCÓN: Los reticulocitos son eritrocitos jóvenes y contienen a su interior RNA – ribosomas el cual puede observarse en forma de red (de ahí su nombre) mediante un colorante supreavital.

​Cuando una medula osea aumenta la eritropoyesis, aumenta también el número dereticulocitos que salen hacia la circulación.

MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO.

Sangre venosa con EDTA

Colorante de azul de cresil brillante o nuevo azul de metileno

Tubos de ensaye

Porta objetos

Pipetas pasteur tallo corto con bulbo

Baño maria

Microscopio

Aceite de inmersión

PROCEDIMIENTO.

1.- Mezclar la muestra sanguínea y en un tubo de ensaye colocar 5 gotas con una pipeta pasteur.

2.- Agrégale 5 gotas de colorante con una pipetapasteur y mezclar

3.- Incubar el tubo de ensaye a 37° C durante un minuto en el baño maria

4.- Mezclar la suspensión y realizar un frotis en portaobjetos

5.- Dejarlo secar a Temp.. ambiente, agregarle una gota de aceite de inmersión y observar con el objetivo 100 X.

6.- Buscar células que presenten una red con coloración azul (reticulocitos). Contar 1000 eritrocitos en diferentes partes del frotis e ir registrando el número de reticulocitos observados.

RESULTADO: Numero de reticulocitos observados x 100

​​   Numero total de eritrocitos.

VALOR DE REFERENCIA

ADULTOS         0.5 – 2.0%

RECIEN NACIDOS 2.5 – 6.5%

Índices Eritrocitarios



HEMOGLOBINA:

Estándar = .363
Muestra = .590

Valor muestra  x 10 = Hb g/dl 
    Estándar

.590 x 10 = 16.25 Hb g/dl
.363

Hb: 16.25 g/dl



CONTEO ERITROCITARIO                              

N. de eritrocitos x 10,000 = N. de eritrocitos /udl

421 x 10.000 = 5,180,000 /udl
4.21 x 10,000 /udl 
4.21 x 10,000 /udl                                



VALOR DE HEMATOCRITO

43%                         
Valores de referencia  42 - 48%

V.C.C                                                            Valores de referencia 82-92 en M^3

Valor de Hto            x 10 = V.C.C.  en M^3
No. De eritrocitos / dl

     

     43                     x 10 = 102.13 en M^3
4.21 /udl

H.C.M.                                                          Valores de referencia 28-32 pg

       Hb gr/dl                            x 10 = H.C.M. pg
No. Eritrocitos / l

      16.25 gr/dl                          x 10 = 38.59 pg
    4.21 x 10,000

C.H.C.M.                                                        Valores de referencia 32-36 %

       Hb gr/dl                  x 10 = C.H.C.M.  en % 
Valor de Hto %

      16.25 g/dl             x 10 = 37.79 %
           4.3 %

Hematocrito

Introducción: 

El hematocrito  es el volumen que ocupan los eritrocitos en una muestra sanguínea y se expresan en porcentaje.

La determinación de hematocrito es un método sencillo y confiable para detectar anemia o policitemia.

El hematocrito se puede determinar por dos métodos:

1.       Macrometodo (Wintrobe)

2.       Micrometodo

Material y reactivos

Tubo de wintrobe                      Sangre venosa

Tubo capilar plastilina

Plastilina

Centrifuga

Microcentrifuga

Pipeta pasteur tallo largo

Equipo para venopunción

Lector para hematocrito o regla

Macrometodo

1.       Mezclar la muestra sanguínea suavemente y con una pipeta pasteur o canula llenar el tubo de wintrobe, colocando la punta de la pipeta hasta el fondo del tubo, la punta de la pipeta se va elevando pero permaneciendo por debajo del menisco de sangre para evitar la formación de burbujas o espuma.

2.       El tubo se llena hasta la marca 100 con la muestra sanguínea y se pone a centrifugar durante 30 minutos a 3,000 r.p.m.

Micrometodo

1.       Mezclar la muestra sanguínea adecuadamente y llenar el tubo capilar hasta 2/3 partes.

1.       El extremo vacío que no estuvo en contacto con la sangre se sella con plastilina o con calor.

2.       El tubo con la muestra sanguínea se coloca en la microcentrifuga a 10,000 r.p.m. durante 10 minutos.

3.       Leer el porcentaje de hematocrito en el lector o medirlo con una regla.

      Conclusión

El realizar pruebas de Hematocrito resulta algo laborioso, y lo es, es necesario tener cuidado al llenar el tubo de wintrobe y el capilar, para que no contengan burbujas de aire. y al sellar el tubo capilar para que al centrifugar no se salga la plastilina o la sangre, o simplemente no se rompa el tubo y tengamos que repetirlo. Al momento de interpretar los resultados ya es un poco mas facil pues los cálculos son menos complicado y son mas exactos que en otros análisis    

Determinación de Hemoglobina (Hb)

SIGNIFICADO CLINICO.

La hemoglobina es una proteína que contiene hierro, otorga el color rojo a la sangre. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada de transportar el oxígeno por la sangre de los pulmones a los tejidos. Cuando el nivel de hemoglobina aparece por debajo de los niveles normales indica anemia que puede obedecer a diferentes causas: anemia primaria, cáncer, embarazo, enfermedades renales o hemorragias. Si el nivel de hemoglobina es alto puede deberse a cardiopatías, deshidratación o estancias en lugares con altitud. El diagnostica clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

MATERIAL.

·         2 Cubetas para espectrofotómetro.

·         Gradilla.||

·         Pipeta.

REACTIVO/MUESTRAS.

·         Cianuro.

·         Sangre con anticoagulante.

·         Reactivo blanco.

Equipo de laboratorio.

·         Espectrofotómetro.

PROCEDIMIENTO.

1.       Condiciones del ensayo:

Longitud de onda…………………..540 nm.

Cubeta…………………………..1 cm de paso.

Temperatura……………………….15-25 Grados C.

2.       Ajustar espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.

3.       Pipetear:

a)      MÉTODO MACRO.        

	BLANCO	PATRÓN	MUESTRA
RT(ML)	5.0	5.0	5.0
CALIBRADOR(µL)		20
MUESTRA(µ			20

b)      METODO MICRO.

	BLANCO	PATRÓN	MUESTRA
RT(ML)	2.5	2.5	2.5
CALIBRADOR(µL)		10
MUETRA(µL)

4.       Mezclar e incubar 3 minutos a temperatura ambiente (15-25ºC).

5.       Leer la absorbancia (A) del calibrador y la muestra frente al Blanco del reactivo.

.

Cálculos:

-         Con factor2 

(A)Muestrax36.77=g/dL de hemoglobina en la muestra.

- Con Patrón:

(A) muestra/(A)Patron x15 (conc. del patron) = d/dL de Hb en la muestra.

 Resultado= 

Muestra numero 1. 15.22 d /dL

Muestra numero 2. 16.5  g/dL

Conclusión: 

Como conclusión de esta práctica podemos aclarar que el resultado obtenido según los cálculos realizados, se encuentra dentro de los valores de referencia. El sujeto ofrecido para aportar la muestra de sangre era de sexo masculino, esto es importante a la hora de comparar los valores de referencia de la cantidad de hemoglobina en la sangre. El resultado obtenido; podemos aclarar que su nivel de hemoglobina es correcto.

Tecnicas Macroscopicas Coproparasitoscopicas: Tamizado

Fundamento:

Se fundamenta en el fenómeno de la filtración, utilizando tamices de diferentes diámetros en donde quedan atrapados los parásitos( trematodos, cestodos, nematodos). Esta técnica permite observar directamente las características morfológicas de los parásitos adultos enteros o fraccionados de los metazoarios.

Material y equipo:

·         1 coladera de tamiz fino

·         1 abatelenguas

·         1 caja Petri

·         1 pinzas

Procedimiento:

1.       Colocar pequeñas porciones de materia fecal en la coladera con ayuda del abatelenguas.

2.       Dispersar la muestra con el abatelenguas y agregarle agua hasta lograr un tamizado lo más limpio posible

3.       Revisar cuidadosamente las partículas de las heces que hayan quedado en la coladera.

4.       Los parásitos encontrados colocarlos en una caja Petri con solución salina.

5.       Se identifica la parte del parasito o el parasito completo

6.       Se reporta el género y la especie del parasito o parte del parasito. 

Conclusión:

El procedimiento de Tamizado, es utilizado para encontrar nematodos en las heces del paciente, es super eficaz y facil de realizar la tecnica, para encontrar los nematodos.

Tecnica de Willis

OBJETIVO

 Aprender a realizar diferente métodos para la identificación y estudio de los parásitos en este caso la búsqueda de huevos y quistes.

FUNDAMENTO

 Willis en 1921, describe este método basado en la propiedad que tienen las soluciones de densidad mayor de hacer flotar objetos menos densos.Este método esta recomendado específicamente para la investigación de protozoarios y helmintos, consiste en la preparar la materia fecal con solución saturada de cloruro de sodio.

Método de concentración por flotación simple.

·         Se usa para la búsqueda e identificación de formas parasitarias como quistes, huevos y helmintos.

·         Se evalúa una gran porción de la muestra.

·         Sensibilidad alta.

·         Fácil rápida y económica.

Es un método de concentración por flotación simple:
en este caso se usa salmuera.
Consiste en preparar el material fecal con Solución saturada de ClNa.
Utilidad
Recomendado especialmente para la investigación de geohelmintos.
Por su sencillez se puede utilizar en el campo, donde no se cuentan con demasiados materiales o reactivos para realizar otros métodos.
Los Huevos de helmintos de peso específico menor que la solución saturada de NaCl tienden a subir y adherirse a una lámina colocada en contacto con la superficie del líquido.
Este método es de alta sensibilidad en el diagnóstico de huevos livianos de helmintos: A. duodenale, N. americanus, A. lumbricoides, H. nana.
Limitaciones
los huevos y quistes de peso especifico menor que la solución saturada de cloruro de sodio tienden a adherirse a un cubreobjetos colocado

MATERIAL

·         Vaso de precipitado

·         Embudo

·         Tubo de ensaye

·         Portaobjetos

·         Cubreobjetos

·         abate lenguas

REACTIVOS

·         Sol. Saturada de NaCl.

·         Sol. De yodo lugol.

PROCEDIMIENTO

1.- Tomar aproximadamente 1 gr. de heces fecales con un abate lenguas.

2.- Colocar la muestra en un vaso de precipitado y mezclar con 10 ml. de solución saturada de cloruro de sodio.

3.-En un tubo de ensaye filtre la mezclar con una gasa, llenando completamente el tubo.

4.-Coloque un portaobjetos sobre el tubo de manera que el líquido haga contacto con el portaobjetos.

5.-Esperamos de 5 a 10 minutos.

6.-Los quistes o huevos flotaran y quedaran adheridos a la cara del portaobjetos que esta en contacto con la mezcla.

7.-Colocar una gota de yodo lugol en el porta objetos y colocar el cubreobjetos.

8.-Examinar la muestra al microscopio con el objetivo 40x, buscamos quistes o huevecillos de parásitos.

9.-Reportar los resultados .

  

OBSERVACIONES

En esta practica realizamos dos muestras diferentes, en la primera no encontramos nada interesante solo logramos ver restos de alimentos y en la segunda un campo de quistes en especial de Entamoeba histolitica.

CONCLUSIÓN 

La tecnica de willis es muy facil y comoda para encontrar los huevesillo de helmintos. es muy economica y sencilla de realizar.

Método de concentración por sedimentacion de "RITCHIE"

Fundamento

Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda de formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios.
Unas ventajas que tiene ése método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para la evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.

Material y equipo

-Centrifuga
-Tubos de ensaye cónicos de 15 ml
-Gasa cortada en cuadros
-Embudos de polietileno
-Vasos de precipitado de 5 ml
-Aplicadores de madera
-Pipetas Pasteur con bulbo
-Portaobjetos de 26 x 76 mm
-Cubreobjetos de 22 x 22 mm
-Microscopio

-Solución salina isotónica
-Solución de formaldehido al 10%
-Éter

Método

a) Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1 gr. de la materia fecal en el vaso de precipitados, se añaden 10 ml de solución salina y se homogeniza

b) Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo, recogiendo el filtrado en el tubo cónico

c) Se centrifuga la suspensión durante 2 minutos a 2000 rpm

d) Se decanta el sobrante y se resuspende el sedimento con solución salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo 2 veces mas

e) Al último sedimento se agregan 10 ml de solución de formaldehído al 10% se mezcla y se deja reposar durante 10 minutos

f) Se añaden después 5 ml de éter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan enérgicamente durante 30 segundos.

g) Se centrifuga durante 2 minutos a 2000 rpm

h) Después de centrifugar se observan 4 capas:
* Éter e la superficial
*Un tapón de restos fecales
*Formaldehído
*Sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios

i) Se decanta el sobrante

j) Se introduce la pipeta Pasteur hasta el sedimento, se extrae con cuidado una gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos

k) Se le añade una gota de lugol y con uno de los ángulos del cubreobjetos se homogeniza, cubriéndolo con el mismo

l) Se observa la preparación en el microscopio con objetivos de 10X y 40X

Conclusion

Esta practica es muy similar a las que hemos venido trabajando, en su proceso se cambian algunas cosas como el agregarle Eter y soluciones como formaldehido al 10%.

Fotos